共焦激光扫描荧光显微镜原理

　　共焦激光扫描荧光显微镜技术的发展是光学显微镜技术的一次革命。它是以光学系统的共焦成像为基础，利用光扫描技术和样品扫描技术对样品进行三维动态测量的装置。它利用激光作为光源，在光学设计时，采用共轭焦点（共焦）技术，使光源、被照物点和探测器处在彼此对应的共轭位置。光源经物镜在样品内聚焦成衍射极限的光点，其荧光（或反射光）再次通过物镜或聚光镜到达空间滤波器的共焦针孔内，由靠近针孔后面的探测接收器接受信号。通过扫描聚光点在样品内的位置对样品进行三维成像图为共焦激光扫描荧光显微镜的原理图它的关键技术是共焦小孔（pinhole）的引入由于共焦小孔的存在，探测器只接收来自物镜焦点处的信息，焦点以外的光将全被共焦小孔屏蔽因而共焦激光扫描显微镜要比常规光学显镜的分辨率要高些，且图像清晰度也有所增强而且正是由于共焦小孔的存在使之具有三维成像的特点，这是常规光学显微镜所不能比拟的。

　　自共焦激光扫描显微镜诞生以来，其应用大多集中在生物医学领域其特点主要体现在样品的反射荧光的观察中这是因为：（1）反射荧光与常规显微镜相比更容易得到高清晰度和高分辨率的三维图像；（2）便于保持理想的共焦光学系统，移动试样和进行三维扫描但是在多光子激发应用到共焦激光扫描显微前，由于光损害、光降解、光漂白等原因，以及显微镜本身复杂的紫外光学元件的限制，共焦激光扫描显微镜不能得到更广泛的应用，其特点和潜力没有完全发挥出来。